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济南国家赛马场---威克赛马专用型口服黏膜免疫微生态使用报告

济南国家赛马场---威克赛马口服黏膜免疫微生态使用报告

平地赛马作为一种竞技运动,对马的要求较高。青年时期的马驹处于速度爆发期,此阶段是赛马的较好候选。自古至今赛马形式变化甚多,但基本原则都是竞赛速度,这也表明高强度的运动下,赛马总有各种疾病的困扰,特别是胃肠道疾病。因此维持赛马的胃肠道菌群平衡,增强机体抵抗力,对延长赛期尤为重要。本文对青年平地赛马进行补喂免疫微生态制剂威克,研究其对平地赛马的免疫机能,为平地赛马的健康养殖提供依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

试剂:免疫微生态制剂威克由中国快三第一平台生产;马血清免疫球蛋G(IgG)试剂盒(ELISA)和马分泌型免疫球蛋白A(SIgA)试剂盒(ELISA)购自上海酶联生物科技有限公司。马血清白介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)(ELISA)试剂盒购自北京华英生物技术公司。

耗材:采血管、采血针、离心管、PBS等常规的试剂由试剂公司购买。

仪器:全自动酶标仪(ELx800);低温高速离心机(TGL20M);电热恒温培养箱(DHP-9082);低速离心机(LDE-2A);均由宝来利来研究院提供。

1.2 基础日粮的配比

马的基础饲粮营养水平参考 NRC(2007)马饲养标准及地方现有饲料条件制定并制成颗粒饲料。日粮组成及营养水平见表 1。

               表1 基础日粮组成及营养水平(%)                

日粮组成

含量

营养水平

含量

玉米

10.00

氯化钠

1.00

高粱

11.80

多矿

0.10

大麦

8.80

多维

0.10

燕麦

13.00

赖氨酸

0.10

次粉

10.00

产中国快三第一平台生素

0.30

麦麸

4.00

酵母锌

0.30

米糠

10.00

生态源

0.05

豆粕43

10.00

T3

0.05

玉米DDGS

8.00

酵母硒

0.30

苜蓿草粉

10.00

50%氯化胆碱

0.10

石粉

1.00

抗氧化剂双乙酸钠

2.00

无水磷酸氢钙

1.00

载体(麸皮)

92.265

注:每千克预混料中含一水氯化钴(饲料级)0.02kg,五水硫酸铜 0.15kg,硫酸亚铁0.01kg,硫酸锰0.01k g,碘酸钙0.02kg,Va(50万单位)0.04kg;VB1 0.003kg;VB1 0.005kg;VB12 0.0035kg;VC 5kg;泛酸0.002kg;烟酰胺VB5 0.0485kg;VD3(50万单位)0.16kg 1 0.003kg;VE 0.01kg。

1.3 试验动物及设计

于2020年2月在济南国际赛马场基地进行试验。试验采用单因素设计试验,选择青年马、体重相近的平地赛马10 匹,随机分成2个组,每组5个重复,每个重复1匹马。所有试验马按照饲养饲养标准饲喂基础日粮,另外,试验组口服免疫微生态制剂威克,每天一次,每次1支,6h内服用完,连用3天。试验期为30 天。

于每日 08:00、14:00、18:00 定量饲喂,先精后粗、少量多次,自由饮水,每个试验组的重复组单圈舍饲养,试验马驹驱虫按马场生产管理进行。

1.4 血清细胞生长因子的测定

   分别于一次使用免疫微生态后的第0d、7d、15d、30d的早8:00,每个试验组5匹试验马,空腹颈静脉采血3 mL,4000 r/min 离心10 min,分离血清,-20℃冻存。马血清中白介素-6(IL-6)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)均用ELISA试剂盒及全自动酶标仪测定。

1.5 血清IgG含量的测定

分别于一次使用免疫微生态后的第0d、7d、15d、30d的早8:00,每个试验组5匹试验马,空腹颈静脉采血3 mL,4000r/min 离心10min,分离血清,-20℃冻存。血清中Ig G含量测定采用马血清免疫球蛋G(IgG)试剂盒(ELISA)及全自动酶标仪测定。  

1.6 粪便 SIgA水平测定

分别于一次使用免疫微生态后的第0d、7d、15d、30d的早08:00采集完血后按各组标准饲喂,将试验马牵入室内圈舍,单栏位拴系并套带收粪袋。将每匹试验马自进圈后至10:00排出的全部粪便收集于集粪桶内,混合均匀后,采用5点取样法采集试验马粪样,每个点采集5±0.5 g,再将5个点共 25±2.5 g粪样混合均匀后立即装入密封袋,-20℃保存待测。

冻存粪样于室温解冻后,分别将各湿粪样于研钵中充分研磨混匀。称取1.0 g 研磨混匀的湿粪于15 mL圆底离心管中,加入10 mL PBS缓冲液(pH7.2),在漩涡振荡器上振荡混匀,4℃下12 000 r/min 离心20 min,吸取上清液利用ELISA检测试剂盒检测各组马新鲜粪便中的SIgA含量。

1.7 试验数据分析

试验结果以“平均值±标准差”表示,采用SPSS 19.0 软件GLM程序进行单因素方差分析,以 P<0.05 表示差异显著。

2 结果

2.1免疫微生态制剂对青年平地赛马血清细胞生长因子的影响

表 2 免疫微生态制剂对青年平地赛马血清细胞生长因子的检测结果(pg/mL)

项目

时间

对照组

试验组

P

IL-6

第0d

80.07±19.21

82.17±13.24

0.884

第7d

90.38±17.46

139.54±10.04

0.013

第15d

111.88±20.31

154.48±17.24

0.050

第31d

145.73±20.12

192.68±19.29

0.042

IFN-γ

第0d

50.26±7.28

51.08±5.23

0.882

第7d

59.43±8.19

82.37±11.22

0.043

第15d

62.87±13.25

90.67±10.23

0.042

第31d

79.56±16.37

108.31±15.28

0.043

TNF-α

第0d

30.45±9.03

31.24±10.17

0.881

第7d

38.67±10.21

65.95±6.03

0.044

第15d

45.89±10.3

73.76±11.45

0.046

第31d

55.21±17.35

82.13±24.23

0.046

研究发现,益生菌分泌的细胞活性因子IL-6、IFN-γ和TNF-α等能够激发免疫应答,促进机体免疫反应[3-6]。本试验结果表明,随着试验马日龄的增加,对照组和试验组的细胞活性因子水平逐渐升高。免疫后的7d、15d和31d,试验组的IL-6、IFN-γ和TNF-α水平均显著高于对照组(P<0.05),第7d时试验组的IL-6、IFN-γ和TNF-α水平的分别比对照组高了54.39%、38.60%和70.54%外。这说明添加免疫微生态制剂威克的添加提高了赛马的细胞活性因子,增强了机体的免疫性能。

2.2 免疫微生态制剂对青年平地赛马血清中IgG含量的影响

表3 免疫微生态制剂对青年平地赛马血清中IgG含量的检测结果(mg/mL)

项目

组别

对照组

试验组

P

IgG

0d

1.47±0.05

1.43±0.03

0.300

7d

2.15±0.13

2.56±0.14

0.020

15d

3.52±1.53

6.15±1.32

0.041

30d

6.97±1.53

10.07±1.36

0.029

血清中的免疫球蛋白主要有IgG、IgA、IgM,这些免疫球蛋白可诱导动物机体产生体液免疫应答,在动物机体免疫中起着重要作用[7-8]。 其中,IgG 主要由脾脏中的浆细胞产生,在抵抗感染中起着重要作用。本试验结果表明,使用免疫微生态制剂威克后的第7d、15d和30d,试验组马血清中的IgG含量均显著高于对照组(P<0.05),第7d时与对照组相比分别提高了41.6%、74.71%和44.47%。这说明免疫微生态制剂可以提高马血清中免疫球蛋白IgG的含量。可能由于免疫微生态制剂刺激机体浆细胞分泌抗体,提高了血清中Ig G的含量,增强机体抗感染的能力。

2.3 免疫微生态制剂对青年平地赛马粪便中SIgA含量的影响

表4  免疫微生态制剂对青年平地赛马粪便中SIgA含量的检测结果(pg/g)

项目

组别

对照组

试验组

P

SIgA

0d

186.33±24.12

193.33±16.78

0.312

7d

187.43±25.37

249.93±19.36

0.001

15d

190.76±27.36

237.97±19.43

0.001

30d

192.37±18.38

242.87±25.21

0.001

分泌型 IgA(SIgA)是参与黏膜免疫反应的重要抗体IgA 占据着黏膜表面,阻止病原体吸附,起到中和抗体的作用,阻止病原体和毒素进入细胞,其抗感染保护作用已被大量研究所证实[9-11]。SIgA 的形成和作用主要局限于黏膜区,同时通过黏膜淋巴细胞的迁徙过程,又广泛分布于身体各处黏膜[12-13]。本试验结果表明:免疫后第7d、15d和30d,试验组的SIgA含量均极显著高于对照组(P<0.01),且分别高于对照组37.08%、40.47%和40.28%。这说明,添加免疫微生态制剂威克可极显著刺激马的黏膜抗体SIgA产生,促进局部黏膜反应,从而引起全身黏膜反应,起到抗感染的作用。

3  结论

(1)免疫微生态制剂威克的添加显著提高试验马在免疫后的细胞活性因子IL-6、IFN-γ和TNF-α水平,免疫后第7d与对照组相比分别提高了54.39%、38.60%和70.54%(P<0.05),增强了机体的免疫性能。

(2)免疫微生态制剂威克的添加显著提高试验马在免疫后的血清IgG含量,免疫后第7d、15d和30d与对照组相比分别提高了41.6%、74.71%和44.47%(P<0.05);

(3)免疫微生态制剂威克的添加极显著提高试验马在免疫后的粪便SIgA的含量,免疫后第7d、15d和30d与对照组相比分别提高了37.08%、40.47%和40.28%(P<0.01),促进机体黏膜免疫反应。


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